Методы контрастирования в световой микроскопии

Видеть невидимое - Все о Микроскопах → Основные параметры микроскопов → Методы контрастирования в световой микроскопии

В современной световой микроскопии выделяют несколько основных методов контрастирования изображения объекта: светлое поле в проходящем свете, светлое поле в отраженном свете, косое освещение, темное поле, фазовый контраст, а также дифференциально-интерференционный контраст. Ниже будет кратно описан каждый метод.

Метод светлого поля. Прежде всего, следует различать светлое поле в проходящем и отраженном свете. Метод светлого поля в проходящем свете используется для изучения прозрачных объектов (просвечивая их, для этого источник света находится снизу). Например, в качестве микропрепарата могут выступать очень тонкие срезы растительных тканей. В случае изучения непрозрачных объектов применяется метод светлого поля в отраженном свете. Здесь осветитель располагается сверху, над изучаемым объектом.

Благодаря различиям в отражающей способности элементов препарата с помощью такого метода можно изучать структуру объекта, отмечать его неоднородности. В качестве объекта может выступать тонкая пластинка (шлиф) металлов. Отдельно стоит выделить метод косого освещения, когда свет направлен под углом (осветитель находится снизу). Благодаря такому методу можно тщательно изучить рельеф объекта по образованным теням.

Метод темного поля. Метод темного поля заключается в освещении объекта так называемым полым конусом света. Свет в таком случае направляется на объект специальным конденсором темного поля: лучи света проходят через препарат и образуют пучок в виде полого конуса, при этом лучи не попадают в объектив (так как объектив находится внутри этого конуса). Данный метод контрастирования применяется при изучении прозрачных объектов, которые при применении метода светлого поля не видны. Такой метод подойдет для изучения живых неокрашенных биологических образцов, например, простейших или отдельных живых клеток.

Метод фазового контраста. Данный метод используется для изучения прозрачных и бесцветных образцов, которые не могут быть рассмотрены методом светлого поля. Это могут быть, например, неокрашенные животные ткани. Метод основан на различиях показателях преломления элементов образца, при этом глазом воспринимаются изменения яркости (так называемый "фазовый рельеф"). Для получения фазово-контрастного изображения используются объективы со специальными фазовыми пластинками, конденсоры с поворачивающимся диском. В результате использования данного метода получают либо позитивный фазовый контраст (изображение темных организмов на светлом фоне) или негативный фазовый контраст (изображение светлых организмов на темном фоне). Также стоит отметить, что если при применении метода темного поля выявляются только лишь контуры объекта, то метод фазового контраста дает возможность рассмотреть элементы внутренней структуры.

Автор: Галетич Юлия
Дата публикации: 01.11.2011
Перепечатка без активной ссылки запрещена

Добавить комментарий

Последние комментарии
ВКонтакте

При использовании данного текста или любой его части, ссылка на www.mikroskope.ru
(<a href=”www.mikroskope.ru” target=_blank>Видеть невидимое - все о микроскопах</a>) обязательна!